“已著手試劑盒產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，預(yù)計(jì)10月中旬開始在我院防癌體檢中心臨床使用，重點(diǎn)檢測(cè)對(duì)象是肝癌高危人群?！?/p>

　　資本、企業(yè)、科研界“垂涎”已久的液體活檢，在肝癌早期診斷上小試牛刀。

　　10月10日，國(guó)際學(xué)術(shù)頂尖雜志《自然材料》發(fā)表了肝癌早期診斷及療效、預(yù)后預(yù)測(cè)的新方法——通過(guò)檢測(cè)少量血液中循環(huán)腫瘤DNA(又稱ctDNA)特定位點(diǎn)的甲基化水平，將肝癌的漏診率降低一半以上，幫助醫(yī)生發(fā)現(xiàn)更多早期肝癌患者。

　　這一技術(shù)屬于液體活檢，由中山大學(xué)腫瘤防治中心主任、中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院院長(zhǎng)徐瑞華，與美國(guó)加州大學(xué)圣地亞哥分校教授張康共同帶領(lǐng)的中美科學(xué)家團(tuán)隊(duì)歷時(shí)5年完成。

　　徐瑞華表示：“我們已經(jīng)著手肝癌甲基化試劑盒的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，預(yù)計(jì)10月中旬開始在我院防癌體檢中心臨床使用。重點(diǎn)檢測(cè)對(duì)象是肝癌高危人群，如既往有肝炎肝硬化病史、肝癌家族史、罹患肝癌接受了手術(shù)等治療的人群，進(jìn)一步推廣到常規(guī)防癌體檢人群?！?/p>

　　除了肝癌，液體活檢在過(guò)去數(shù)年里吸引了大大小小的資本、企業(yè)關(guān)注。各家企業(yè)或從海外引入技術(shù)，或自主研發(fā)，涉及的癌癥種類繁多，發(fā)布的平臺(tái)各式各樣，已出現(xiàn)細(xì)分領(lǐng)域的龍頭企業(yè)，但尚未形成明顯的市場(chǎng)格局。

　　同時(shí)，作為新生事物，國(guó)內(nèi)外獲批的液體活檢產(chǎn)品寥寥無(wú)幾，在全球還沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)業(yè)整體處于科研探索、驗(yàn)證階段。更關(guān)鍵的是，它隨時(shí)可能被叫停，就像三年前基因檢測(cè)臨床應(yīng)用突然被叫停一樣。

　　早期發(fā)現(xiàn)新方法

　　“腫瘤液體活檢技術(shù)將迎來(lái)一個(gè)全新時(shí)代?！薄蹲匀徊牧稀返膶徃鍖＜胰绱丝偨Y(jié)此次科研成果。

　　裕策生物CEO高志博告訴21世紀(jì)經(jīng)濟(jì)報(bào)道記者：“目前，液體活檢的主要商業(yè)應(yīng)用在產(chǎn)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。近年來(lái)隨著技術(shù)進(jìn)步，液體活檢在腫瘤早篩、靶向用藥指導(dǎo)和復(fù)發(fā)監(jiān)控等方面的應(yīng)用越來(lái)越多，甚至針對(duì)腫瘤免疫治療的ctDNA-TMB檢測(cè)也逐步興起。”

　　液體活檢是體外診斷的一個(gè)分支。按照檢測(cè)樣本不同，腫瘤分子診斷分為傳統(tǒng)的組織活檢和新型的液體活檢。

　　相比之下，組織活檢需要通過(guò)手術(shù)或者穿刺，獲取腫瘤最有代表性部位的組織作為檢測(cè)樣本，這種獲取組織樣本的方法給患者帶來(lái)很大痛苦，而且有些患者的病情并不適合組織活檢，因?yàn)橛行┠[瘤在受到手術(shù)擾動(dòng)后，存在加速轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。該技術(shù)取樣不易，也導(dǎo)致不能多次取樣進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)。

　　液體活檢的出現(xiàn)讓患者看到了曙光。其通過(guò)血液或尿液等對(duì)癌癥做出診斷，優(yōu)勢(shì)在于能通過(guò)非侵入性取樣，降低活檢危害，甚至能有效延長(zhǎng)患者生存期。目前液體活檢的主要檢測(cè)物包括血液中游離的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)，ctDNA碎片，循環(huán)RNA和外泌體。

　　其中，腫瘤細(xì)胞凋亡、壞死后釋放到血液中的游離DNA片段稱為ctDNA。由于其攜帶與原發(fā)腫瘤一致的甲基化改變，理論上可以利用ctDNA的甲基化譜對(duì)腫瘤進(jìn)行診斷。

　　但是，ctDNA在血液中的含量極微，每毫升血液中僅有約20ng，相當(dāng)于一滴水的一億分之一，并且混雜在大量正常游離DNA中。如何在這么微量的ctDNA中檢測(cè)單個(gè)堿基的甲基化水平，一直是困擾科研界的難題。

　　徐瑞華總結(jié)了科研取得突破的關(guān)鍵性實(shí)驗(yàn)技術(shù)：從少量外周血中穩(wěn)定提取微量ctDNA的手段，提高甲基化檢測(cè)必需的重亞硫酸鹽的轉(zhuǎn)化效率，甲基化探針設(shè)計(jì)使得高通量擴(kuò)增和測(cè)序成為可能等。

　　另外，中山大學(xué)腫瘤防治中心具有豐富的肝癌病例來(lái)源。張康表示：“這個(gè)項(xiàng)目對(duì)1983例臨床樣本進(jìn)行研究，是迄今為止最大的臨床樣本量用于肝癌甲基化模型的研究。”

　　該研發(fā)成果應(yīng)用于臨床后，或許能降低肝癌早期診斷的誤診、漏診率。

　　據(jù)了解，傳統(tǒng)的AFP(甲胎蛋白檢測(cè))早期診斷肝癌的敏感性在60%左右，這意味著單純依靠AFP檢測(cè)只能發(fā)現(xiàn)60%左右真正的肝癌患者，漏診率為40%;此外，AFP對(duì)肝癌的診斷特異性在80%左右，這意味著有20%左右的非肝癌患者會(huì)由于其他原因，如妊娠、慢性肝炎肝硬化、胚胎源性腫瘤、轉(zhuǎn)移性肝癌等引起AFP升高，即對(duì)肝癌的誤診率為20%。

　　“甲基化標(biāo)志物對(duì)肝癌的診斷敏感性為84.9%，  特異性為93.1%，這意味著漏診率降至15%左右，誤診率更是降至7%左右，”徐瑞華指出，“我們的甲基化診斷模型還與患者的腫瘤負(fù)荷、治療反應(yīng)和復(fù)發(fā)密切相關(guān)，有利于醫(yī)生及時(shí)調(diào)整治療方案?！?/p>

　　在此次研究基礎(chǔ)上，徐瑞華和張康所在的團(tuán)隊(duì)已開始收集臨床上接受靶向治療的肝癌患者標(biāo)本，希望通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)具有療效預(yù)測(cè)價(jià)值的甲基化位點(diǎn)，預(yù)測(cè)患者對(duì)靶向藥物的療效。同時(shí)，繼續(xù)研究ctDNA甲基化標(biāo)志物在結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等其他常見腫瘤中的應(yīng)用。

　　大規(guī)模應(yīng)用仍需時(shí)日

　　雖然研發(fā)取得突破，但“準(zhǔn)生證”還在路上。

　　徐瑞華向21世紀(jì)經(jīng)濟(jì)報(bào)道記者透露，目前該肝癌甲基化試劑盒已經(jīng)獲得3個(gè)國(guó)家醫(yī)療器械備案證，另外一個(gè)正在申報(bào)中。其團(tuán)隊(duì)的研究合作方也在廣州科學(xué)城建立了符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的試劑盒生產(chǎn)車間，并完成了中試生產(chǎn)，預(yù)計(jì)今年12月大規(guī)模生產(chǎn)，屆時(shí)年供應(yīng)試劑盒100萬(wàn)人份。

　　產(chǎn)品剛剛?cè)〉每蒲型黄?、走在申?bào)的路上、還需要積累大量的臨床應(yīng)用數(shù)據(jù)，這是液體活檢從業(yè)者的常態(tài)。

　　四年前，液體活檢伴隨著基因測(cè)序技術(shù)的突飛猛進(jìn)進(jìn)入一個(gè)全新時(shí)代。國(guó)外有Guardant Health、Foundation  Medicine、Pathway  Genomics、Grail投身其中，中國(guó)有華大基因、吉因加、泛生子、燃石、海普洛斯等公司紛紛涉足。2015年，液體活檢被《麻省理工科技評(píng)論》評(píng)選為“十大突破技術(shù)”。

　　高志博坦言：“液體活檢在不同方向上的成熟度不同，靶向用藥指導(dǎo)較為成熟，也是基因檢測(cè)公司爭(zhēng)奪的熱點(diǎn)。在資本的大力推動(dòng)下，眾多公司迅速推廣檢測(cè)產(chǎn)品搶占市場(chǎng)，競(jìng)爭(zhēng)十分激烈，企業(yè)獲得臨床監(jiān)管許可證之后，競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)會(huì)更加明顯。”

　　參與者眾多，但正式獲批的產(chǎn)品只有6個(gè)，包括FDA批準(zhǔn)的三款液態(tài)活檢相關(guān)的產(chǎn)品：楊森診斷公司的CellSearch、Epigenomics公司的EpiproColon技術(shù)和羅氏的cobas  EGFR突變檢測(cè)試劑盒v2;CFDA批準(zhǔn)的三款：楊森診斷公司的CellSearch，格諾思博公司的葉酸受體陽(yáng)性CTC檢測(cè)試劑盒、友芝友公司的循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速染色液。

　　“液體活檢技術(shù)本身面臨一些困難，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化之前先要解決基礎(chǔ)研究和技術(shù)上的一些問(wèn)題，像是假陽(yáng)性率、ctDNA的來(lái)源鑒別、不同方法檢測(cè)結(jié)果一致性、如何確定擁有臨床意義的‘閾值問(wèn)題’等。另外，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和監(jiān)管也是很大挑戰(zhàn)?！备咧静┱f(shuō)。

　　高特佳投資集團(tuán)執(zhí)行合伙人王海蛟則認(rèn)為：“產(chǎn)業(yè)化難題主要是產(chǎn)品本身的標(biāo)準(zhǔn)和臨床對(duì)產(chǎn)品的認(rèn)可，是否可以進(jìn)入臨床路徑和指南中。臨床應(yīng)用現(xiàn)在處于各個(gè)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的個(gè)性化應(yīng)用階段，沒(méi)有形成共識(shí)。”

　　另外，產(chǎn)業(yè)鏈上游也面臨技術(shù)壁壘。液體活檢產(chǎn)業(yè)鏈分為上游的捕獲、基因擴(kuò)增、試劑以及儀器市場(chǎng)，中游是檢測(cè)服務(wù)市場(chǎng)，下游數(shù)據(jù)市場(chǎng)。根據(jù)動(dòng)脈網(wǎng)統(tǒng)計(jì)，目前國(guó)內(nèi)涉足上游捕獲市場(chǎng)的企業(yè)有13家，基因擴(kuò)增相關(guān)企業(yè)6家，中游環(huán)節(jié)布局企業(yè)37家。

　　高志博告訴記者：“相比上游市場(chǎng)被國(guó)內(nèi)外巨頭企業(yè)壟斷之外，中下游應(yīng)用是個(gè)新興市場(chǎng)，細(xì)分方向也很多。除特有的技術(shù)和數(shù)據(jù)之外，最重要的是做好終端服務(wù)?！?/p>

　　即便是攻克了技術(shù)關(guān)卡獲批，臨床應(yīng)用的挑戰(zhàn)也不小。根據(jù)2015年中國(guó)衛(wèi)計(jì)委批準(zhǔn)的第一批腫瘤診斷與治療項(xiàng)目高通量基因測(cè)序技術(shù)臨床試點(diǎn)單位，國(guó)內(nèi)有臨床應(yīng)用資質(zhì)的企業(yè)只有五家，其余皆為公立醫(yī)院。

　　廣州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科主任技師雷秀霞指出，液體活檢的應(yīng)用不僅面臨技術(shù)考驗(yàn)，價(jià)格也是一大影響因素?！昂芏囗?xiàng)目因?yàn)槌杀驹驘o(wú)法開展，而且富集技術(shù)還需要臨床研究積累，納米技術(shù)、腫瘤細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)也還不完善。”

　　即便如此，廣闊的市場(chǎng)想象空間還是讓資本、企業(yè)趨之若鶩，投資額也屢刷新高。證券公司Piper  Jaffray測(cè)算，預(yù)計(jì)2026年液體活檢市場(chǎng)容量將達(dá)到326億美元，其中癌癥領(lǐng)域286億美元，未來(lái)10年的復(fù)合增長(zhǎng)率約保持在21.7%。

　　“行業(yè)還處于初創(chuàng)、早期階段，沒(méi)有明顯的行業(yè)龍頭。因?yàn)槭菬狳c(diǎn)，現(xiàn)在標(biāo)的估值很高。”王海蛟說(shuō)。